Preparación de genotecas de ADNc de Plasmodium falciparum para la búsqueda de los genes de proteínas de unión a calmodulina, GOGAT y Pfmyo A.

Resumen

Se construyó una genoteca de ADNc representativa de los estadios asexuales de Plasmodium falciparum, en el vector lZipLox. Esta genoteca (de la cepa colombiana FCB2) y otra genoteca construida en lZAP II (de la cepa Dd2), se rastrearon en busca de genes de proteínas que se unen a calmodulina (CaM) o a proteínas relacionadas con CaM. Para el rastreo se usó tanto el ensayo de Hot-start PCR como la hibridización de filtros réplica con sondas radiomarcadas. Se identificaron clones de actina I, calmodulina (CaM), glutamato sintasa (GOGAT) y las tres miosinas Pfmyo A, Pfmyo B y Pfmyo C. Se aislaron clones para actina I, CaM y GOGAT en la genoteca construida en lZipLox y clones para GOGAT y Pfmyo A en la genoteca construida en lZAP II. Uno de los clones de GOGAT contiene un inserto de 2.413 pb que corresponde al 24,8% de la secuencia codificante informada. El inserto de Pfmyo A aislado tiene 2.457 pb y representa el mensajero completo del gen. La identidad de este inserto se confirmó mediante análisis de restricción. Este es el primer informe de un clon de ADNc completo de la miosina A de P. falciparum. Los clones aislados se utilizarán en estudios futuros, tales como la obtención de las proteínas recombinantes, producción de anticuerpos y ensayos de funcionalidad.