Obtención de medios condicionados de células madre estromales/mesenquimales de gelatina de Warthon en un sistema de cultivo dinámico

Resumen

Introducción. Las células madre/estromales mesenquimales (MSCs, por sus siglas en inglés) tienen un gran potencial para uso terapéutico y ejercen efectos antiinflamatorios, antiapoptóticos y proangiogénicos a través de su secretoma.
Las MSCs aisladas de la gelatina de Wharton (WJ-MSCs, por su sigla en inglés) se han descrito como una de las mejores fuentes de MSCs y su secretoma es rico en moléculas bioactivas con la capacidad de mantener la homeostasis celular y tisular para el tratamiento de patologías asociadas a procesos inflamatorios, heridas de la piel, trastornos neurodegenerativos y diabetes.
Objetivo. Describir un protocolo para la obtención de medios condicionados de WJ-MSCs a partir de cultivos celulares dinámicos, teniendo en cuenta que el cultivo de MSCs en sistemas tridimensionales ofrece ventajas sobre los cultivos bidimensionales, al replicar mejor las condiciones del microambiente celular in vivo.
Materiales y métodos. Se utilizaron WJ-MSCs para el desarrollo de los experimentos. La caracterización de las WJ-MSCs se realizó mediante evaluación de su inmunofenotipo por citometría de flujo y evaluación de la multipotencialidad por inducción de la diferenciación a linajes mesenquimales, in vitro.
Las WJ-MSCs se cultivaron en cultivos 2D en monocapa y cultivos 3D en un biorreactor Applikon Biotechnology de 3L utilizando micro perlas plásticas como microtransportadores. Se estandarizó la obtención de los medios condicionados y se realizó la detección de 43 factores angiogénicos, utilizando un sistema de micromatriz de anticuerpos para angiogénesis humana.
Resultados. Las WJ-MSCs aisladas mostraron características típicas de MSCs. El cultivo de WJ-MSCs en sistemas 3D facilitó la escalabilidad y la secreción mejorada de factores angiogénicos en comparación con los cultivos 2D.
Conclusiones. Se utilizó cultivos 3D y 2D de WJ-MSCs para la obtención del secretoma de las WJ-MSCs. El cultivo 3D permite obtener volúmenes significativamente mayores de medio condicionado con una potencial capacidad angiogénica incrementada.