Producción de la proteína recombinante JAK2 de ratón

Resumen

El presente trabajo describe la producción de la proteina recombinante JAK2, empleando un sistema de vectores de expresión baculovirales. La infección de células Sf9, derivadas del tejido de ovario de Spodoptera frugiperda, permitió establecer las condiciones óptimas de dilución del virus en 10 pllml de medio y de tiempo de recolección en 72 horas postinfección. Se recolectaron y ultrafiltraron extractos correspondientes a la infección de 5 x 10' células, aproximadamente, y se sometieron a cromatografia de intercambio iónico (DEAE-Sephacel), lográndose purificar parcialmente la proteina JAK2 por medio de un gradiente continuo de fuerza iónica (NaCI 10-500 mM). La presencia de JAK2 se verificó por Western blot, empleando un anticuerpo policlonal producido en conejo contra los residuos 758-776 de JAK2 de ratón. Los resultados indicaron que la proteína obtenida por este sistema de expresión se sintetiza en forma fosforiladalactivada.